W poprzednim projekcie testującym lokalne zakłady przetwórstwa spożywczego pod kątem komarów w Tajlandii stwierdzono, że olejki eteryczne (EO) Cyperus rotundus, galangal i cynamon mają dobre działanie przeciw komarom przeciwko Aedes aegypti.Próbując ograniczyć użycie tradycyjnychśrodki owadobójczei poprawy kontroli populacji opornych komarów, badanie to miało na celu określenie potencjalnego synergizmu pomiędzy działaniem tlenku etylenu zabijającym dorosłe osobniki a toksycznością permetryny dla komarów Aedes.aegypti, w tym szczepy oporne na pyretroidy i wrażliwe.
Ocena składu chemicznego i działania zabójczego EO wyekstrahowanego z kłączy C. rotundus i A. galanga oraz kory C. verum przeciwko wrażliwemu szczepowi Muang Chiang Mai (MCM-S) i opornemu szczepowi Pang Mai Dang (PMD-R ).) Dorosły aktywny Ae.Aedes aegypti.Na komarach Aedes przeprowadzono także biotest mieszaniny EO i permetryny u dorosłych osobników, aby poznać jej działanie synergistyczne.szczepy aegypti.
Charakterystyka chemiczna przy użyciu metody analitycznej GC-MS wykazała, że z EO C. rotundus, A. galanga i C. verum zidentyfikowano 48 związków, co stanowi odpowiednio 80,22%, 86,75% i 97,24% wszystkich składników.Cyperen (14,04%), β-bisabolen (18,27%) i aldehyd cynamonowy (64,66%) to główne składniki odpowiednio olejku cyperus, olejku galangowego i olejku balsamicznego.W biologicznych testach zabijania dorosłych osobników C. rotundus, A. galanga i C. verum EV skutecznie zabijały Ae.aegypti, MCM-S i PMD-R Wartości LD50 wyniosły odpowiednio 10,05 i 9,57 µg/mg dla kobiet, 7,97 i 7,94 µg/mg dla kobiet oraz 3,30 i 3,22 µg/mg dla kobiet.Skuteczność MCM-S i PMD-R Ae w zabijaniu dorosłych.aegypti w tych EO była bliska butanolanu piperonylu (wartości PBO, LD50 = odpowiednio 6,30 i 4,79 μg/mg kobiet), ale nie tak wyraźna jak permetryna (wartości LD50 = odpowiednio 0,44 i 3,70 ng/mg kobiet).Jednak kombinowane testy biologiczne wykazały synergię między EO i permetryną.Znaczący synergizm z permetryną przeciwko dwóm szczepom komarów Aedes.Aedes aegypti odnotowano w EM C. rotundus i A. galanga.Dodatek olejków C. rotundus i A. galanga znacząco obniżył wartości LD50 permetryny na MCM-S z 0,44 do 0,07 ng/mg i 0,11 ng/mg u kobiet, odpowiednio, przy wartościach współczynnika synergii (SR) odpowiednio 6,28 i 4,00.Ponadto EO C. rotundus i A. galanga również znacząco zmniejszyły wartości LD50 permetryny na PMD-R z 3,70 do 0,42 ng/mg i 0,003 ng/mg u kobiet, odpowiednio, przy wartościach SR wynoszących 8,81 i Odpowiednio 1233,33..
Synergistyczne działanie kombinacji EO-permetryny w celu zwiększenia toksyczności u dorosłych wobec dwóch szczepów komarów Aedes.Aedes aegypti wykazuje obiecującą rolę tlenku etylenu jako synergetyka zwiększającego skuteczność przeciw komarom, szczególnie tam, gdzie tradycyjne związki są nieskuteczne lub niewłaściwe.
Komar Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) jest głównym wektorem gorączki denga i innych zakaźnych chorób wirusowych, takich jak żółta febra, chikungunya i wirus Zika, stanowiąc ogromne i trwałe zagrożenie dla ludzi[1, 2]..Wirus dengi to najpoważniejsza patogenna gorączka krwotoczna atakująca człowieka, z szacunkową liczbą 5–100 milionów przypadków rocznie i ponad 2,5 miliarda ludzi na całym świecie zagrożonych [3].Wybuchy tej choroby zakaźnej stanowią ogromne obciążenie dla populacji, systemów opieki zdrowotnej i gospodarek większości krajów tropikalnych [1].Według tajskiego Ministerstwa Zdrowia w 2015 r. w całym kraju odnotowano 142 925 przypadków gorączki denga i 141 zgonów, co stanowi ponad trzykrotność liczby przypadków i zgonów w 2014 r. [4].Pomimo dowodów historycznych gorączka denga została wyeliminowana lub znacznie zmniejszona przez komara Aedes.Po opanowaniu Aedes aegypti [5] liczba infekcji wzrosła dramatycznie, a choroba rozprzestrzeniła się na cały świat, częściowo z powodu dziesięcioleci globalnego ocieplenia.Eliminacja i kontrola Ae.Aedes aegypti jest stosunkowo trudnym gatunkiem, ponieważ jest to domowy wektor komarów, który w ciągu dnia łączy się w pary, żeruje, odpoczywa i składa jaja w pomieszczeniach mieszkalnych i wokół nich.Ponadto komar ten ma zdolność przystosowywania się do zmian środowiskowych lub zakłóceń spowodowanych zdarzeniami naturalnymi (takimi jak susza) lub środkami kontroli człowieka i może powrócić do swojej pierwotnej liczebności [6, 7].Ponieważ szczepionki przeciwko gorączce denga zostały zatwierdzone dopiero niedawno i nie ma specyficznego leczenia gorączki denga, zapobieganie i zmniejszanie ryzyka przeniesienia dengi zależy wyłącznie od kontrolowania komarów – wektorów i eliminowania kontaktu człowieka z wektorami.
W szczególności stosowanie środków chemicznych do zwalczania komarów odgrywa obecnie ważną rolę w zdrowiu publicznym jako ważny element kompleksowego zintegrowanego zarządzania wektorami.Do najpopularniejszych metod chemicznych zalicza się stosowanie niskotoksycznych środków owadobójczych, które działają przeciwko larwom komarów (larwicydy) i dorosłym komarom (adidocydy).Uważa się, że ważne jest zwalczanie larw poprzez redukcję źródła i regularne stosowanie chemicznych środków larwicydowych, takich jak fosforany organiczne i regulatory wzrostu owadów.Jednakże niekorzystny wpływ na środowisko związany z syntetycznymi pestycydami oraz ich pracochłonną i złożoną konserwacją pozostaje poważnym problemem [8, 9].Tradycyjna aktywna kontrola wektorów, taka jak kontrola dorosłych, pozostaje najskuteczniejszym sposobem kontroli podczas epidemii wirusów, ponieważ może szybko i na dużą skalę wyeliminować wektory chorób zakaźnych, a także skrócić długość życia i długowieczność lokalnych populacji wektorów [3]., 10].Cztery klasy chemicznych środków owadobójczych: chloroorganiczne (określane jedynie jako DDT), fosforany organiczne, karbaminiany i pyretroidy stanowią podstawę programów zwalczania wektorów, przy czym pyretroidy są uważane za klasę najskuteczniejszą.Są bardzo skuteczne przeciwko różnym stawonogom i mają niską skuteczność.toksyczność dla ssaków.Obecnie syntetyczne pyretroidy stanowią większość dostępnych w handlu pestycydów, stanowiąc około 25% światowego rynku pestycydów [11, 12].Permetryna i deltametryna to insektycydy pyretroidowe o szerokim spektrum działania, stosowane na całym świecie od dziesięcioleci do zwalczania różnych szkodników o znaczeniu rolniczym i medycznym [13, 14].W latach pięćdziesiątych XX wieku DDT zostało wybrane jako substancja chemiczna z wyboru w ramach krajowego programu zwalczania komarów w zakresie zdrowia publicznego w Tajlandii.W związku z powszechnym stosowaniem DDT na obszarach endemicznych malarii, Tajlandia w latach 1995–2000 stopniowo wycofywała się ze stosowania DDT i zastąpiła je dwoma pyretroidami: permetryną i deltametryną [15, 16].Te pyretroidowe insektycydy wprowadzono na początku lat 90. XX wieku w celu zwalczania malarii i gorączki denga, głównie poprzez obróbkę moskitierami oraz stosowanie mgły termicznej i sprayów o ultraniskiej toksyczności [14, 17].Straciły jednak skuteczność ze względu na silną odporność na komary i brak zgodności ze społeczeństwem w związku z obawami o zdrowie publiczne i wpływem syntetycznych chemikaliów na środowisko.Stanowi to poważne wyzwanie dla powodzenia programów kontroli wektorów zagrożeń [14, 18, 19].Aby strategia była skuteczniejsza, konieczne jest podjęcie w odpowiednim czasie odpowiednich środków zaradczych.Zalecane procedury postępowania obejmują substytucję substancji naturalnych, rotację substancji chemicznych różnych klas, dodawanie synergetyków oraz mieszanie substancji chemicznych lub jednoczesne stosowanie substancji chemicznych różnych klas [14, 20, 21].Dlatego istnieje pilna potrzeba znalezienia i opracowania przyjaznej dla środowiska, wygodnej i skutecznej alternatywy oraz synergetyka, a niniejsze badanie ma na celu zaspokojenie tej potrzeby.
Insektycydy pochodzenia naturalnego, zwłaszcza te na bazie składników roślinnych, wykazały potencjał w ocenie obecnych i przyszłych alternatywnych metod zwalczania komarów [22, 23, 24].Kilka badań wykazało, że możliwe jest zwalczanie ważnych wektorów komarów poprzez stosowanie produktów roślinnych, zwłaszcza olejków eterycznych (EO), jako zabójców dorosłych osobników.Wiele olejów roślinnych, takich jak seler, kminek, zedoaria, anyż, papryka fajkowa, tymianek, Schinus terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis, wykazano działanie owadobójcze na dorosłe osobniki przeciwko niektórym ważnym gatunkom komarów. ., Eucalyptus citriodora, Cananga odorata i Petroselinum Criscum [25,26,27,28,29,30].Tlenek etylenu jest obecnie stosowany nie tylko sam, ale także w połączeniu z ekstrahowanymi substancjami roślinnymi lub istniejącymi syntetycznymi pestycydami, co powoduje różny stopień toksyczności.Kombinacje tradycyjnych środków owadobójczych, takich jak fosforany organiczne, karbaminiany i pyretroidy, z tlenkiem etylenu/ekstraktami roślinnymi działają synergistycznie lub antagonistycznie w działaniu toksycznym i wykazano, że są skuteczne przeciwko wektorom chorób i szkodnikom [31,32,33,34,35].Jednakże większość badań nad synergistycznym działaniem toksycznym kombinacji fitochemikaliów z syntetycznymi chemikaliami lub bez nich przeprowadzono na owadach- wektorach i szkodnikach rolniczych, a nie na komarach ważnych z medycznego punktu widzenia.Co więcej, większość prac nad synergistycznym działaniem kombinacji roślinno-syntetycznych środków owadobójczych przeciwko wektorom komarów skupiała się na działaniu larwobójczym.
W poprzednim badaniu przeprowadzonym przez autorów w ramach trwającego projektu badawczego sprawdzającego środki zabójcze stosowane w rodzimych roślinach spożywczych w Tajlandii, stwierdzono, że tlenki etylenu z Cyperus rotundus, galangalu i cynamonu mają potencjalne działanie przeciwko dorosłym Aedes.Egipt [36].Dlatego też celem tego badania była ocena skuteczności EO wyizolowanych z tych roślin leczniczych przeciwko komarom Aedes.aegypti, w tym szczepy oporne na pyretroidy i wrażliwe.Przeanalizowano również synergiczne działanie binarnych mieszanin tlenku etylenu i syntetycznych pyretroidów o dobrej skuteczności u dorosłych w celu ograniczenia stosowania tradycyjnych środków owadobójczych i zwiększenia odporności na komary, wektory, zwłaszcza przeciwko Aedes.Aedes aegypti.W artykule przedstawiono charakterystykę chemiczną skutecznych olejków eterycznych i ich potencjał zwiększania toksyczności syntetycznej permetryny wobec komarów Aedes.aegypti u szczepów wrażliwych na pyretroidy (MCM-S) i szczepów opornych (PMD-R).
Kłącza C. rotundus i A. galanga oraz kora C. verum (ryc. 1) użyte do ekstrakcji olejku eterycznego zakupiono od dostawców leków ziołowych w prowincji Chiang Mai w Tajlandii.Naukową identyfikację tych roślin przeprowadzono po konsultacjach z panem Jamesem Franklinem Maxwellem, botanikiem zielnikowym na Wydziale Biologii College of Science na Uniwersytecie Chiang Mai (CMU) w prowincji Chiang Mai w Tajlandii oraz naukowcem Wannarim Charoensapem;na Wydziale Farmacji, College of Pharmacy, Carnegie Mellon University, Pani Voucher próbki każdej rośliny są przechowywane na Wydziale Parazytologii w Carnegie Mellon University School of Medicine do wykorzystania w przyszłości.
Próbki roślin suszono indywidualnie w cieniu przez 3–5 dni na otwartej przestrzeni z aktywną wentylacją i temperaturą otoczenia około 30 ± 5 ° C w celu usunięcia wilgoci przed ekstrakcją naturalnych olejków eterycznych (EO).Łącznie 250 g każdego suchego materiału roślinnego zmielono mechanicznie na gruby proszek i wykorzystano do wyizolowania olejków eterycznych (EO) poprzez destylację z parą wodną.Aparat do destylacji składał się z elektrycznego płaszcza grzejnego, kolby okrągłodennej o pojemności 3000 ml, kolumny ekstrakcyjnej, chłodnicy i urządzenia Cool ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokio, Japonia) .Do kolby dodać 1600 ml wody destylowanej i 10-15 perełek szklanych, a następnie podgrzać ją do około 100°C za pomocą grzejnika elektrycznego przez co najmniej 3 godziny, aż do zakończenia destylacji i zaprzestania wytwarzania EO.Warstwę EO oddzielono od fazy wodnej za pomocą rozdzielacza, wysuszono nad bezwodnym siarczanem sodu (Na2SO4) i przechowywano w szczelnie zamkniętej brązowej butelce w temperaturze 4°C do czasu zbadania składu chemicznego i aktywności dorosłych osobników.
Równolegle z badaniem biologicznym na obecność substancji dorosłej przeprowadzono badanie składu chemicznego olejków eterycznych.Analizę jakościową przeprowadzono przy użyciu systemu GC-MS składającego się z chromatografu gazowego Hewlett-Packard (Wilmington, Kalifornia, USA) 7890A wyposażonego w pojedynczy kwadrupolowy detektor selektywny masowo (Agilent Technologies, Wilmington, Kalifornia, USA) i MSD 5975C (EI ).(Agilent Technologies).
Kolumna chromatograficzna – DB-5MS (30 m × ID 0,25 mm × grubość warstwy 0,25 µm).Całkowity czas analizy GC-MS wyniósł 20 minut.Warunki analizy są takie, że temperatury wtryskiwacza i przewodu przesyłowego wynoszą odpowiednio 250 i 280 °C;temperatura pieca ma rosnąć od 50°C do 250°C z szybkością 10°C/min, gazem nośnym jest hel;natężenie przepływu 1,0 ml/min;objętość wstrzyknięcia wynosi 0,2 µl (1/10% objętościowo w CH2Cl2, współczynnik podziału 100:1);Do detekcji GC-MS stosuje się układ jonizacji elektronowej o energii jonizacji 70 eV.Zakres akwizycji wynosi 50–550 jednostek masy atomowej (u), a prędkość skanowania wynosi 2,91 skanów na sekundę.Względne procenty składników wyrażono jako procenty znormalizowane przez powierzchnię piku.Identyfikacja składników EO opiera się na ich wskaźniku retencji (RI).RI obliczono za pomocą równania Van den Doola i Kratza [37] dla szeregu n-alkanów (C8-C40) i porównano ze wskaźnikami retencji z literatury [38] i baz bibliotecznych (NIST 2008 i Wiley 8NO8).Tożsamość przedstawionych związków, taką jak struktura i wzór cząsteczkowy, potwierdzono poprzez porównanie z dostępnymi autentycznymi próbkami.
Wzorce analityczne dla syntetycznej permetryny i butanolanu piperonylu (PBO, kontrola pozytywna w badaniach synergii) zakupiono od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).Zestawy do testów dla dorosłych Światowej Organizacji Zdrowia (WHO) i dawki diagnostyczne papieru impregnowanego permetryną (0,75%) zakupiono w Centrum Kontroli Wektorów WHO w Penang w Malezji.Wszystkie pozostałe użyte chemikalia i odczynniki miały czystość analityczną i zostały zakupione od lokalnych instytucji w prowincji Chiang Mai w Tajlandii.
Komary użyte jako organizmy testowe w teście biologicznym u dorosłych osobników były swobodnie krzyżującymi się laboratoryjnymi komarami Aedes.aegypti, w tym podatny szczep Muang Chiang Mai (MCM-S) i oporny szczep Pang Mai Dang (PMD-R).Szczep MCM-S uzyskano z lokalnych próbek pobranych w rejonie Muang Chiang Mai w prowincji Chiang Mai w Tajlandii i od 1995 roku przechowywany jest w pracowni entomologicznej Katedry Parazytologii CMU School of Medicine [39].Szczep PMD-R, który okazał się oporny na permetrynę, wyizolowano z komarów polowych pierwotnie zebranych w Ban Pang Mai Dang w dystrykcie Mae Tang w prowincji Chiang Mai w Tajlandii i trzymano go w tym samym instytucie od 1997 r. [40 ]Szczepy PMD-R hodowano pod presją selekcyjną w celu utrzymania poziomu oporności poprzez okresową ekspozycję na 0,75% permetrynę przy użyciu zestawu do wykrywania WHO z pewnymi modyfikacjami [41].Każdy szczep Ae.Aedes aegypti kolonizowano indywidualnie w laboratorium wolnym od patogenów w temperaturze 25 ± 2 ° C i wilgotności względnej 80 ± 10% oraz w świetle/ciemności w godzinach 14:10.Około 200 larw trzymano na plastikowych tacach (33 cm długości, 28 cm szerokości i 9 cm wysokości) wypełnionych wodą wodociągową w gęstości 150–200 larw na tacę i karmiono dwa razy dziennie sterylizowanymi ciastkami dla psów.Dorosłe robaki trzymano w wilgotnych klatkach i karmiono w sposób ciągły 10% wodnym roztworem sacharozy i 10% roztworem syropu multiwitaminowego.Samice komarów regularnie wysysają krew, aby złożyć jaja.Samice w wieku od dwóch do pięciu dni, które nie były karmione krwią, można w sposób ciągły wykorzystywać w eksperymentalnych testach biologicznych na dorosłych.
Test biologiczny EO w zależności od dawki i śmiertelności przeprowadzono na dorosłych samicach komarów Aedes.aegypti, MCM-S i PMD-R metodą miejscową zmodyfikowaną zgodnie ze standardowym protokołem WHO dotyczącym badania wrażliwości [42].EO z każdej rośliny rozcieńczano seryjnie odpowiednim rozpuszczalnikiem (np. etanolem lub acetonem) w celu uzyskania stopniowanej serii 4-6 stężeń.Po znieczuleniu dwutlenkiem węgla (CO2) komary ważono indywidualnie.Znieczulone komary trzymano następnie w bezruchu na suchej bibule filtracyjnej na niestandardowej zimnej płytce pod stereomikroskopem, aby zapobiec ponownej aktywacji podczas zabiegu.W przypadku każdego zabiegu na górne przedplecze samicy nanoszono 0,1 µl roztworu EO przy użyciu ręcznego mikrodozownika Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, USA).Każdym stężeniem leczono dwadzieścia pięć kobiet, a śmiertelność wahała się od 10% do 95% dla co najmniej 4 różnych stężeń.Komary traktowane rozpuszczalnikiem służyły jako kontrola.Aby zapobiec zanieczyszczeniu badanych próbek, dla każdego badanego EO należy wymienić bibułę filtracyjną na nową.Dawki stosowane w tych testach biologicznych wyrażono w mikrogramach EO na miligram żywej masy ciała kobiety.Aktywność dorosłego PBO również oceniano w podobny sposób jak EO, przy czym PBO stosowano jako kontrolę pozytywną w eksperymentach synergistycznych.Leczone komary we wszystkich grupach umieszczono w plastikowych kubkach i podano im 10% sacharozę plus 10% syrop multiwitaminowy.Wszystkie testy biologiczne przeprowadzono w temperaturze 25 ± 2°C i przy wilgotności względnej 80 ± 10% i powtórzono czterokrotnie z kontrolami.Śmiertelność w ciągu 24-godzinnego okresu odchowu sprawdzono i potwierdzono brakiem reakcji komara na stymulację mechaniczną, a następnie zarejestrowano na podstawie średniej z czterech powtórzeń.Zabiegi eksperymentalne powtórzono czterokrotnie dla każdej próbki testowej, stosując różne partie komarów.Wyniki podsumowano i wykorzystano do obliczenia procentowego współczynnika śmiertelności, który posłużył do określenia 24-godzinnej dawki śmiertelnej metodą analizy probitowej.
Synergistyczne działanie przeciwbójcze EO i permetryny oceniano za pomocą procedury testu toksyczności lokalnej [42], jak opisano wcześniej.Użyj acetonu lub etanolu jako rozpuszczalnika, aby przygotować permetrynę o pożądanym stężeniu, a także binarną mieszaninę EO i permetryny (EO-permetryna: permetryna zmieszana z EO o stężeniu LD25).Zestawy testowe (permetryna i EO-permetryna) oceniano w stosunku do szczepów Ae MCM-S i PMD-R.Aedes aegypti.Każdej z 25 samic komarów podano cztery dawki permetryny w celu sprawdzenia jej skuteczności w zabijaniu dorosłych, przy czym każde leczenie powtarzano czterokrotnie.Aby zidentyfikować kandydatów na synergetyków EO, każdej z 25 samic komarów podano od 4 do 6 dawek EO-permetryny, przy czym każde podanie powtarzano czterokrotnie.Traktowanie PBO-permetryną (permetryna zmieszana ze stężeniem PBO LD25) również służyło jako kontrola pozytywna.Dawki stosowane w tych testach biologicznych wyrażono w nanogramach badanej próbki na miligram żywej masy ciała kobiety.Przeprowadzono cztery oceny eksperymentalne każdego szczepu komara na indywidualnie hodowanych partiach, a dane dotyczące śmiertelności zebrano i przeanalizowano za pomocą programu Probit w celu określenia 24-godzinnej dawki śmiertelnej.
Do skorygowania współczynnika umieralności wykorzystano wzór Abbotta [43].Skorygowane dane poddano analizie metodą regresji Probit przy użyciu komputerowego programu statystycznego SPSS (wersja 19.0).Wartości śmiertelne wynoszące 25%, 50%, 90%, 95% i 99% (odpowiednio LD25, LD50, LD90, LD95 i LD99) obliczono przy użyciu odpowiednich 95% przedziałów ufności (95% CI).Pomiary istotności i różnice między badanymi próbkami oceniano za pomocą testu chi-kwadrat lub testu U Manna-Whitneya w każdym teście biologicznym.Wyniki uznano za istotne statystycznie w punkcie P< 0,05.Współczynnik rezystancji (RR) szacuje się na poziomie LD50, korzystając ze wzoru [12]:
RR > 1 oznacza rezystancję, a RR ≤ 1 oznacza czułość.Wartość współczynnika synergii (SR) każdego kandydata na synergetyka oblicza się w następujący sposób [34, 35, 44]:
Czynnik ten dzieli wyniki na trzy kategorie: uważa się, że wartość SR wynosząca 1 ± 0,05 nie ma widocznego wpływu, wartość SR > 1,05 uważa się za wywierającą efekt synergistyczny, a wartość SR wynosząca Jasnożółty ciekły olej może być otrzymywany w drodze destylacji z parą wodną kłączy C. rotundus i A. galanga oraz kory C. verum.Wydajność obliczona w przeliczeniu na suchą masę wynosiła 0,15%, 0,27% (wag.) i 0,54% (v/v).w) odpowiednio (Tabela 1).Badanie GC-MS składu chemicznego olejków C. rotundus, A. galanga i C. verum wykazało obecność 19, 17 i 21 związków, co stanowiło odpowiednio 80,22, 86,75 i 97,24% wszystkich składników (tab. 2). ).Związki olejowe z kłącza C. lucidum składają się głównie z cyperonenu (14,04%), następnie karralenu (9,57%), α-kapsellanu (7,97%) i α-kapsellanu (7,53%).Głównym składnikiem chemicznym olejku z kłącza galangi jest β-bisabolen (18,27%), następnie α-bergamoten (16,28%), 1,8-cyneol (10,17%) i piperonol (10,09%).Podczas gdy aldehyd cynamonowy (64,66%) został zidentyfikowany jako główny składnik olejku z kory C. verum, to octan cynamonu (6,61%), α-kopaen (5,83%) i aldehyd 3-fenylopropionowy (4,09%) uznano za składniki drugorzędne.Struktury chemiczne cyperne, β-bisabolenu i aldehydu cynamonowego są głównymi związkami odpowiednio C. rotundus, A. galanga i C. verum, jak pokazano na rycinie 2.
Wyniki trzech OO oceniły aktywność dorosłych osobników przeciwko komarom Aedes.aegypti przedstawiono w Tabeli 3. Stwierdzono, że wszystkie EO mają śmiercionośny wpływ na komary MCM-S Aedes w różnych typach i dawkach.Aedes aegypti.Najskuteczniejszym EO jest C. verum, a następnie A. galanga i C. rotundus z wartościami LD50 wynoszącymi odpowiednio 3,30, 7,97 i 10,05 µg/mg samic MCM-S, nieco powyżej 3,22 (U = 1 ), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) i 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) µg/mg PMD -R u kobiet.Odpowiada to PBO mającemu nieco większy wpływ na PMD-R u dorosłych osobników niż szczep MSM-S, z wartościami LD50 odpowiednio 4,79 i 6,30 µg/mg dla samic (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057) .).Można obliczyć, że wartości LD50 dla C. verum, A. galanga, C. rotundus i PBO w stosunku do PMD-R są odpowiednio około 0,98, 0,99, 0,95 i 0,76 razy niższe niż w przypadku MCM-S.Oznacza to zatem, że podatność na PBO i EO jest stosunkowo podobna pomiędzy dwoma szczepami Aedes.Chociaż PMD-R był bardziej wrażliwy niż MCM-S, czułość Aedes aegypti nie była znacząca.Natomiast oba szczepy Aedes różniły się znacznie pod względem wrażliwości na permetrynę.aegypti (tabela 4).PMD-R wykazał znaczną oporność na permetrynę (wartość LD50 = 0,44 ng/mg u kobiet) z wyższą wartością LD50 wynoszącą 3,70 w porównaniu do MCM-S (wartość LD50 = 0,44 ng/mg u kobiet) ng/mg u kobiet (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029).Chociaż PMD-R jest znacznie mniej wrażliwy na permetrynę niż MCM-S, jego wrażliwość na PBO i olejki C. verum, A. galanga i C. rotundus jest nieco wyższa niż MCM-S.
Jak zaobserwowano w teście biologicznym kombinacji EO i permetryny w populacji dorosłych, binarne mieszaniny permetryny i EO (LD25) wykazały albo synergię (wartość SR > 1,05), albo brak efektu (wartość SR = 1 ± 0,05).Złożone działanie mieszaniny EO-permetryny na dorosłe osobniki na eksperymentalne komary albinosy.Szczepy Aedes aegypti MCM-S i PMD-R przedstawiono w Tabeli 4 i Rycinie 3. Stwierdzono, że dodatek olejku C. verum nieznacznie zmniejsza LD50 permetryny w stosunku do MCM-S i nieznacznie zwiększa LD50 w stosunku do PMD-R do 0,44– odpowiednio 0,42 ng/mg u kobiet i od 3,70 do 3,85 ng/mg u kobiet.Natomiast dodatek olejków C. rotundus i A. galanga znacząco obniżył LD50 permetryny na MCM-S z 0,44 do 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) i do 0,11 (U = 0 )., Z) = -2,309, P = 0,029) ng/mg kobiety.Na podstawie wartości LD50 MCM-S wartości SR mieszaniny EO-permetryna po dodaniu olejków C. rotundus i A. galanga wyniosły odpowiednio 6,28 i 4,00.Odpowiednio, LD50 permetryny w stosunku do PMD-R znacząco spadło z 3,70 do 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) i do 0,003 po dodaniu olejków C. rotundus i A. galanga (U = 0 ) ., Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg kobieta.Wartość SR permetryny w połączeniu z C. rotundus wobec PMD-R wyniosła 8,81, natomiast wartość SR mieszaniny galangal-permetryna wyniosła 1233,33.W porównaniu do MCM-S wartość LD50 kontroli dodatniej PBO spadła z 0,44 do 0,26 ng/mg (kobiety) i z 3,70 ng/mg (kobiety) do 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) i PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029).Wartości SR mieszaniny PBO-permetryna dla szczepów MCM-S i PMD-R wyniosły odpowiednio 1,69 i 5,69.Wyniki te wskazują, że oleje C. rotundus i A. galanga oraz PBO zwiększają toksyczność permetryny w większym stopniu niż olej C. verum dla szczepów MCM-S i PMD-R.
Aktywność dorosłych (LD50) EO, PBO, permetryny (PE) i ich kombinacji przeciwko wrażliwym na pyretroidy (MCM-S) i opornym (PMD-R) szczepom komarów Aedes.Aedes aegypti
[45].Syntetyczne pyretroidy są stosowane na całym świecie do zwalczania prawie wszystkich stawonogów o znaczeniu rolniczym i medycznym.Jednakże ze względu na szkodliwe skutki stosowania syntetycznych środków owadobójczych, zwłaszcza w zakresie rozwoju i powszechnej oporności komarów, a także wpływ na długoterminowe zdrowie i środowisko, istnieje obecnie pilna potrzeba ograniczenia ich stosowania tradycyjnych syntetycznych środków owadobójczych i opracować alternatywy [35, 46, 47].Oprócz ochrony środowiska i zdrowia ludzkiego, do zalet botanicznych środków owadobójczych zalicza się wysoką selektywność, globalną dostępność oraz łatwość produkcji i stosowania, co czyni je bardziej atrakcyjnymi w zwalczaniu komarów [32,48, 49].W badaniu tym, oprócz wyjaśnienia właściwości chemicznych skutecznych olejków eterycznych za pomocą analizy GC-MS, oceniono także siłę działania olejków eterycznych dla dorosłych i ich zdolność do zwiększania toksyczności syntetycznej permetryny.aegypti u szczepów wrażliwych na pyretroidy (MCM-S) i szczepów opornych (PMD-R).
Charakterystyka GC-MS wykazała, że głównymi składnikami olejków C. rotundus, A. galanga i C. verum były cypern (14,04%), β-bisabolen (18,27%) i aldehyd cynamonowy (64,66%).Substancje te wykazują różnorodne działanie biologiczne.Ahn i in.[50] podali, że 6-acetoksycyperen wyizolowany z kłącza C. rotundus działa jako związek przeciwnowotworowy i może indukować zależną od kaspazy apoptozę w komórkach raka jajnika.β-Bisabolen, ekstrahowany z olejku eterycznego z drzewa mirry, wykazuje specyficzną cytotoksyczność wobec ludzkich i mysich komórek nowotworu sutka zarówno in vitro, jak i in vivo [51].Donoszono, że aldehyd cynamonowy, otrzymywany z naturalnych ekstraktów lub syntetyzowany w laboratorium, ma działanie owadobójcze, przeciwbakteryjne, przeciwgrzybicze, przeciwzapalne, immunomodulujące, przeciwnowotworowe i antyangiogenne [52].
Wyniki biologicznego testu aktywności dorosłego osobnika zależnego od dawki wykazały dobry potencjał badanych EO i wykazały, że szczepy komarów Aedes MCM-S i PMD-R mają podobną wrażliwość na EO i PBO.Aedes aegypti.Porównanie skuteczności EO i permetryny wykazało, że ta ostatnia ma silniejsze działanie alerkobójcze: wartości LD50 u samic wynoszą 0,44 i 3,70 ng/mg odpowiednio dla szczepów MCM-S i PMD-R.Odkrycia te potwierdzają liczne badania wykazujące, że naturalnie występujące pestycydy, zwłaszcza produkty pochodzenia roślinnego, są na ogół mniej skuteczne niż substancje syntetyczne [31, 34, 35, 53, 54].Może tak być dlatego, że ten pierwszy jest złożoną kombinacją składników aktywnych lub nieaktywnych, podczas gdy drugi jest oczyszczonym pojedynczym związkiem aktywnym.Jednakże różnorodność i złożoność naturalnych składników aktywnych o różnych mechanizmach działania może zwiększać aktywność biologiczną lub utrudniać rozwój oporności w populacjach żywicieli [55, 56, 57].Wielu badaczy donosiło o potencjale przeciw komarom C. verum, A. galanga i C. rotundus oraz ich składników, takich jak β-bisabolen, aldehyd cynamonowy i 1,8-cyneol [22, 36, 58, 59, 60,61, 62,63,64].Jednakże przegląd literatury ujawnił, że nie było wcześniejszych doniesień o jego synergistycznym działaniu z permetryną lub innymi syntetycznymi środkami owadobójczymi przeciwko komarom Aedes.Aedes aegypti.
W tym badaniu zaobserwowano istotne różnice we wrażliwości na permetrynę pomiędzy dwoma szczepami Aedes.Aedes aegypti.MCM-S jest wrażliwy na permetrynę, podczas gdy PMD-R jest na nią znacznie mniej wrażliwy, ze współczynnikiem oporności 8,41.W porównaniu z czułością MCM-S, PMD-R jest mniej wrażliwy na permetrynę, ale bardziej wrażliwy na EO, co daje podstawę do dalszych badań mających na celu zwiększenie efektywności permetryny poprzez połączenie jej z EO.Synergiczny, oparty na kombinacji test biologiczny dotyczący skutków u dorosłych wykazał, że binarne mieszaniny EO i permetryny zmniejszają lub zwiększają śmiertelność dorosłych Aedes.Aedes aegypti.Dodatek olejku C. verum nieznacznie obniżył LD50 permetryny w stosunku do MCM-S, ale nieznacznie zwiększył LD50 w stosunku do PMD-R przy wartościach SR odpowiednio 1,05 i 0,96.Wskazuje to, że olej C. verum nie ma synergistycznego ani antagonistycznego działania na permetrynę, gdy jest testowany na MCM-S i PMD-R.Natomiast olejki C. rotundus i A. galanga wykazały znaczący efekt synergiczny poprzez znaczne zmniejszenie wartości LD50 permetryny na MCM-S lub PMD-R.Kiedy permetrynę połączono z EO C. rotundus i A. galanga, wartości SR mieszaniny EO-permetryna dla MCM-S wyniosły odpowiednio 6,28 i 4,00.Dodatkowo, gdy permetrynę oceniano względem PMD-R w połączeniu z C. rotundus (SR = 8,81) lub A. galanga (SR = 1233,33), wartości SR znacząco wzrosły.Warto zauważyć, że zarówno C. rotundus, jak i A. galanga zwiększały toksyczność permetryny wobec PMD-R Ae.aegypti znacząco.Podobnie stwierdzono, że PBO zwiększa toksyczność permetryny przy wartościach SR wynoszących 1,69 i 5,69 odpowiednio dla szczepów MCM-S i PMD-R.Ponieważ C. rotundus i A. galanga miały najwyższe wartości SR, uznano je za najlepszych synergetyków zwiększających toksyczność permetryny odpowiednio w stosunku do MCM-S i PMD-R.
W kilku wcześniejszych badaniach donoszono o synergicznym działaniu kombinacji syntetycznych środków owadobójczych i ekstraktów roślinnych przeciwko różnym gatunkom komarów.Test biologiczny larwobójczy przeciwko Anopheles Stephensi, przeprowadzony przez Kalayanasundarama i Dasa [65] wykazał, że fention, organofosforan o szerokim spektrum działania, był powiązany z Cleodendron inerme, Pedalium murax i Parthenium hysterophorus.Zaobserwowano znaczną synergię pomiędzy ekstraktami z efektem synergistycznym (SF) wynoszącym 1,31.odpowiednio 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 i 2,23.W badaniu przesiewowym larwobójczym 15 gatunków namorzynów stwierdzono, że ekstrakt w eterze naftowym z korzeni palowych namorzynów jest najskuteczniejszy przeciwko Culex quinquefasciatus przy wartości LC50 wynoszącej 25,7 mg/l [66].Donoszono również, że synergiczne działanie tego ekstraktu i botanicznego środka owadobójczego złocienia zmniejsza LC50 złocienia przeciwko larwom C. quinquefasciatus z 0,132 mg/l do 0,107 mg/l, ponadto w tym badaniu zastosowano obliczenie SF wynoszące 1,23.34,35,44].Oceniono łączną skuteczność ekstraktu z korzenia cytronu Solanum i kilku syntetycznych środków owadobójczych (np. fentionu, cypermetryny (syntetyczny pyretroid) i timethfosu (larwicyd organofosforowy)) przeciwko komarom Anopheles.Stephensi [54] i C. quinquefasciatus [34].Połączone zastosowanie cypermetryny i ekstraktu eteru naftowego z żółtych owoców wykazało synergistyczny wpływ na cypermetrynę we wszystkich proporcjach.Najbardziej efektywnym stosunkiem była kombinacja binarna 1:1 z wartościami LC50 i SF odpowiednio 0,0054 ppm i 6,83 w stosunku do An.Stephena Westa[54].Podczas gdy binarna mieszanina S. xanthocarpum i temephos w stosunku 1:1 była antagonistyczna (SF = 0,6406), kombinacja S. xanthocarpum-fention (1:1) wykazywała działanie synergistyczne przeciwko C. quinquefasciatus z SF wynoszącym 1,3125 [34]].Tong i Blomquist [35] badali wpływ roślinnego tlenku etylenu na toksyczność karbarylu (karbaminianu o szerokim spektrum działania) i permetryny dla komarów Aedes.Aedes aegypti.Wyniki wykazały, że tlenek etylenu z agaru, czarnego pieprzu, jałowca, kocanki, drzewa sandałowego i sezamu zwiększa toksyczność karbarylu wobec komarów Aedes.aegypti larvae Wartości SR wahają się od 1,0 do 7,0.Natomiast żaden z EO nie był toksyczny dla dorosłych komarów Aedes.Na tym etapie nie zgłoszono żadnych efektów synergistycznych dla kombinacji Aedes aegypti i EO-carbaryl.PBO zastosowano jako kontrolę pozytywną w celu zwiększenia toksyczności karbarylu wobec komarów Aedes.Wartości SR larw i dorosłych osobników Aedes aegypti wynoszą odpowiednio 4,9-9,5 i 2,3.Jedynie binarne mieszaniny permetryny i EO lub PBO badano pod kątem działania larwobójczego.Mieszanina EO-permetryna działała antagonistycznie, natomiast mieszanina PBO-permetryna działała synergicznie przeciwko komarom Aedes.Larwy Aedes aegypti.Jednakże nie przeprowadzono jeszcze eksperymentów z odpowiedzią na dawkę i oceny SR dla mieszanin PBO-permetryna.Chociaż osiągnięto niewiele wyników dotyczących synergistycznego działania kombinacji fitosyntetyków przeciwko wektorom komarów, dane te potwierdzają istniejące wyniki, które otwierają perspektywę dodania synergetyków nie tylko w celu zmniejszenia stosowanej dawki, ale także zwiększenia efektu zabijania.Wydajność owadów.Dodatkowo wyniki tego badania wykazały po raz pierwszy, że olejki C. rotundus i A. galanga wykazują synergistycznie znacznie wyższą skuteczność przeciwko wrażliwym i opornym na pyretroidy szczepom komarów Aedes w porównaniu z PBO w połączeniu z toksycznością permetryny.Aedes aegypti.Jednakże nieoczekiwane wyniki analizy synergistycznej wykazały, że olej C. verum miał największą aktywność przeciw dorosłym osobnikom przeciwko obu szczepom Aedes.Co zaskakujące, toksyczne działanie permetryny na Aedes aegypti było niezadowalające.Różnice w działaniu toksycznym i efektach synergistycznych mogą częściowo wynikać z narażenia na różne rodzaje i poziomy składników bioaktywnych w tych olejach.
Pomimo wysiłków mających na celu zrozumienie, jak poprawić efektywność, mechanizmy synergiczne pozostają niejasne.Możliwe przyczyny różnej skuteczności i potencjału synergicznego mogą obejmować różnice w składzie chemicznym testowanych produktów oraz różnice w podatności komarów związane ze stanem i rozwojem oporności.Istnieją różnice pomiędzy głównymi i drugorzędnymi składnikami tlenku etylenu testowanymi w tym badaniu, a wykazano, że niektóre z tych związków mają działanie odstraszające i toksyczne wobec różnych szkodników i wektorów chorób [61,62,64,67,68].Jednakże główne związki scharakteryzowane w olejkach C. rotundus, A. galanga i C. verum, takie jak cypern, β-bisabolen i aldehyd cynamonowy, nie zostały przetestowane w tym artykule pod kątem ich odpowiednio działania przeciw dorosłym i synergistycznego działania przeciwko Ae.Aedes aegypti.Dlatego potrzebne są przyszłe badania w celu wyizolowania składników aktywnych obecnych w każdym olejku eterycznym i wyjaśnienia ich skuteczności owadobójczej i synergistycznych interakcji przeciwko temu wektorowi komarów.Ogólnie działanie owadobójcze zależy od działania i reakcji pomiędzy truciznami a tkankami owadów, co można uprościć i podzielić na trzy etapy: penetracja skóry owada i błon narządów docelowych, aktywacja (= interakcja z celem) i detoksykacja.substancje toksyczne [57, 69].Zatem synergizm insektycydów skutkujący zwiększoną skutecznością kombinacji substancji toksycznych wymaga co najmniej jednej z tych kategorii, takich jak zwiększona penetracja, większa aktywacja nagromadzonych związków lub mniejsza zmniejszona detoksykacja aktywnego składnika pestycydu.Na przykład tolerancja energetyczna opóźnia penetrację naskórka przez pogrubiony naskórek i odporność biochemiczną, taką jak zwiększony metabolizm środków owadobójczych obserwowany u niektórych odpornych szczepów owadów [70, 71].Znacząca skuteczność EO w zwiększaniu toksyczności permetryny, zwłaszcza wobec PMD-R, może wskazywać na rozwiązanie problemu oporności na insektycydy poprzez oddziaływanie z mechanizmami oporności [57, 69, 70, 71].Tong i Blomquist [35] poparli wyniki tego badania, wykazując synergiczną interakcję pomiędzy EO i syntetycznymi pestycydami.aegypti istnieją dowody na działanie hamujące enzymów detoksykujących, w tym monooksygenaz i karboksyloesteraz cytochromu P450, które są ściśle związane z rozwojem oporności na tradycyjne pestycydy.Uważa się, że PBO nie tylko jest metabolicznym inhibitorem monooksygenazy cytochromu P450, ale także poprawia penetrację środków owadobójczych, co wykazano poprzez jego zastosowanie jako kontroli pozytywnej w badaniach synergistycznych [35, 72].Co ciekawe, 1,8-cyneol, jeden z ważnych składników oleju galangowego, jest znany ze swojego toksycznego działania na gatunki owadów [22, 63, 73] i donoszono, że ma działanie synergiczne w kilku obszarach badań aktywności biologicznej [ 74]..,75,76,77].Ponadto 1,8-cyneol w połączeniu z różnymi lekami, w tym kurkuminą [78], 5-fluorouracylem [79], kwasem mefenamowym [80] i zydowudyną [81] również ma działanie sprzyjające przenikaniu.in vitro.Zatem możliwa rola 1,8-cyneolu w synergistycznym działaniu owadobójczym polega nie tylko na roli składnika aktywnego, ale także na wzmacniaczu penetracji.Ze względu na większy synergizm z permetryną, zwłaszcza z PMD-R, zaobserwowane w tym badaniu synergistyczne działanie olejku galangowego i olejku trichosanthes może wynikać z interakcji z mechanizmami oporności, tj. zwiększoną przepuszczalnością dla chloru.Pyretroidy zwiększają aktywację nagromadzonych związków i hamują enzymy detoksykujące, takie jak monooksygenazy i karboksyloesterazy cytochromu P450.Jednakże aspekty te wymagają dalszych badań w celu wyjaśnienia szczególnej roli EO i jego izolowanych związków (samodzielnie lub w kombinacji) w mechanizmach synergistycznych.
W 1977 roku odnotowano rosnący poziom oporności na permetrynę w głównych populacjach wektorów w Tajlandii, a w ciągu następnych dziesięcioleci stosowanie permetryny zostało w dużej mierze zastąpione innymi chemikaliami z grupy pyretroidów, zwłaszcza tymi zastąpionymi deltametryną [82].Jednakże oporność wektorów na deltametrynę i inne klasy środków owadobójczych jest niezwykle powszechna w całym kraju ze względu na nadmierne i uporczywe stosowanie [14, 17, 83, 84, 85, 86].Aby zaradzić temu problemowi, zaleca się rotację lub ponowne wykorzystanie wyrzuconych pestycydów, które wcześniej były skuteczne i mniej toksyczne dla ssaków, takich jak permetryna.Obecnie, chociaż w ostatnich rządowych programach zwalczania komarów zmniejszono stosowanie permetryny, w populacjach komarów nadal stwierdza się oporność na permetrynę.Może to wynikać z narażenia komarów na dostępne w gospodarstwie domowym środki do zwalczania szkodników, które składają się głównie z permetryny i innych pyretroidów [14, 17].Zatem pomyślne ponowne wykorzystanie permetryny wymaga opracowania i wdrożenia strategii mających na celu zmniejszenie oporności wektorów.Chociaż żaden z olejków eterycznych testowanych indywidualnie w tym badaniu nie był tak skuteczny jak permetryna, współpraca z permetryną dała imponujące efekty synergiczne.Jest to obiecująca wskazówka, że interakcja EO z mechanizmami oporności powoduje, że połączenie permetryny z EO jest bardziej skuteczne niż sam środek owadobójczy lub sam EO, szczególnie przeciwko PMD-R Ae.Aedes aegypti.Korzyści z mieszanin synergicznych w zwiększaniu skuteczności, pomimo stosowania niższych dawek do zwalczania wektorów, mogą prowadzić do lepszego zarządzania opornością i zmniejszenia kosztów [33, 87].Na podstawie tych wyników miło jest zauważyć, że EO A. galanga i C. rotundus były znacznie skuteczniejsze niż PBO w synergizowaniu toksyczności permetryny zarówno w szczepach MCM-S, jak i PMD-R i stanowią potencjalną alternatywę dla tradycyjnych środków ergogenicznych.
Wybrane EO wykazywały znaczące działanie synergistyczne w zwiększaniu toksyczności u dorosłych wobec PMD-R Ae.aegypti, zwłaszcza olejek galangowy, ma wartość SR aż do 1233,33, co wskazuje, że EO ma szerokie nadzieje jako synergetyk zwiększający skuteczność permetryny.Może to pobudzić stosowanie nowego aktywnego produktu naturalnego, co łącznie może zwiększyć stosowanie wysoce skutecznych produktów do zwalczania komarów.Ujawnia także potencjał tlenku etylenu jako alternatywnego synergetyka umożliwiającego skuteczne ulepszenie starszych lub tradycyjnych środków owadobójczych w celu rozwiązania istniejących problemów z opornością w populacjach komarów.Stosowanie łatwo dostępnych roślin w programach zwalczania komarów nie tylko zmniejsza zależność od importowanych i drogich materiałów, ale także stymuluje lokalne wysiłki na rzecz wzmocnienia systemów zdrowia publicznego.
Wyniki te wyraźnie pokazują znaczący efekt synergistyczny wywołany połączeniem tlenku etylenu i permetryny.Wyniki podkreślają potencjał tlenku etylenu jako synergetyka roślin w zwalczaniu komarów, zwiększającego skuteczność permetryny przeciwko komarom, szczególnie w populacjach opornych.Przyszły rozwój i badania będą wymagały synergistycznej bioanalizy olejków galangowych i alpinia oraz ich izolowanych związków, kombinacji środków owadobójczych pochodzenia naturalnego lub syntetycznego przeciwko wielu gatunkom i stadiom komarów oraz testów toksyczności wobec organizmów niebędących przedmiotem zwalczania.Praktyczne zastosowanie tlenku etylenu jako realnego alternatywnego synergetyka.
Światowa Organizacja Zdrowia.Globalna strategia zapobiegania i kontroli dengi na lata 2012–2020.Genewa: Światowa Organizacja Zdrowia, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G. i in.Wirus Zika: historia, pojawienie się, biologia i perspektywy kontroli.Badania antywirusowe.2016;130:69–80.
Światowa Organizacja Zdrowia.Arkusz informacyjny dotyczący dengi.2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/.Data dostępu: 20 stycznia 2017 r
Departament Zdrowia Publicznego.Aktualny stan przypadków gorączki denga i gorączki krwotocznej denga w Tajlandii.2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf.Data dostępu: 6 stycznia 2017 r
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ.35 lat zapobiegania dendze i kontroli wektorów w Singapurze.Nagła choroba zakaźna.2006;12:887–93.
Morrison AC, Zieliński-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Identyfikacja wyzwań i proponowanie rozwiązań w zakresie kontroli wektorów wirusa Aedes aegypti.Lek PLOS.2008;5:362–6.
Centra Kontroli i Zapobiegania Chorobom.Gorączka denga, entomologia i ekologia.2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/.Data dostępu: 6 stycznia 2017 r
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Porównanie działania larwobójczego liści, kory, łodyg i korzeni Jatropa curcas (Euphorbiaceae) z wektorem malarii Anopheles gambiae.SZhBR.2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Charakterystyka siedliskowa larw Anopheles na obszarach malarii objętych programem zwalczania malarii w południowo-wschodnim Iranie.Azja i Pacyfik J Trop Biomed.2014;4(Suplement 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Przegląd podejść do kontroli wektorów, zapobiegania i kontroli ognisk wirusa Zachodniego Nilu oraz wyzwań stojących przed Europą.Wektor pasożytów.2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Selekcja i molekularne mechanizmy oporności na cypermetrynę u gąsienic czerwonych (Amsacta albistriga Walker).Fizjologia biochemiczna szkodników.2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Badania laboratoryjne oporności na permetrynę i oporności krzyżowej Culex quinquefasciatus na inne środki owadobójcze.Centrum Badawcze Palastora.2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD.Chemia pestycydów: dobrostan człowieka i środowisko, tom.3: Mechanizm działania, metabolizm i toksykologia.Nowy Jork: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Przegląd odporności na środki owadobójcze i unikania zachowań ludzkich wektorów chorób w Tajlandii.Wektor pasożytów.2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Aktualne wzorce oporności na środki owadobójcze wśród wektorów komarów w Tajlandii.Azja Południowo-Wschodnia J Trop Med Zdrowie publiczne.1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Stan malarii w Tajlandii.Azja Południowo-Wschodnia J Trop Med Zdrowie publiczne.2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Częstotliwość czasowa mutacji oporności na powalenie F1534C i V1016G u komarów Aedes aegypti w Chiang Mai w Tajlandii oraz wpływ mutacji na skuteczność termicznych rozpylaczy mgły zawierające pyretroidy.Aktatrop.2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Odporność na środki owadobójcze u głównych wektorów dengi Aedes albopictus i Aedes aegypti.Fizjologia biochemiczna szkodników.2012;104:126–31.
Czas publikacji: 8 lipca 2024 r